Расшифровка анализа крови ПЦР на гепатит С

ПЦР на гепатит С – так чаще всего в сокращенном варианте звучит одно из главных исследований в диагностике хронического воспалительного процесса в печени. Применяются различные варианты ПЦР-диагностики, поэтому выбор конкретного исследования делает лечащий доктор. Метод отличается высокой чувствительностью, информативностью и быстротой проведения.

Что такое ПЦР диагностика?

Анализ ПЦР позволяет определить РНК или ДНК микробного агента в биологической жидкости пациента даже при его минимальной концентрации. Для этого используется специальная аппаратура – амплификатор. Сначала присутствующие в биологической жидкости пациента участки РНК или ДНК многократно копируются – содержание генетического материала возбудителя увеличивается. После этого этапа становится возможной идентификация микробного агента с помощью образца (праймера).

Каждый живой организм обладает уникальной последовательностью нуклеотидов в ДНК или РНК. Отдельные участки могут быть похожи, но именно определение всей структуры в целом позволяет избежать некорректного ответа. Благодаря такому принципу неправильно расшифровать результат ПЦР и, соответственно, поставить ошибочный диагноз невозможно.

Использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) предполагает не только идентификацию возбудителя, но и динамику его репликации. В диагностике HCV-инфекции (гепатита С) в режиме реального времени оценивается количество копий вируса – так называемая вирусная нагрузка.

Преимущества и недостатки метода лабораторной диагностики

ПЦР-диагностика в практическом здравоохранении рассматривается как одна из наиболее информативных и удобных благодаря следующим особенностям:

• быстрота проведения – всего 2-3 часа (редко больше) и готов окончательный результат;
• удобство — не требуется особенной подготовки для пациента перед забором биологической жидкости;
• достоверность и специфичность – практически исключены ложные ответы, так как подобраны праймеры (образцы) для большинства известных микроорганизмов;
• универсальность – если есть праймер, то идентифицирован будет любой возбудитель, даже вирус небольших размеров или внутриклеточно расположенный паразит, даже если количество микробного агента невелико;
• информативность – определяется факт наличия возбудителя в биологической жидкости пациента, а не иммунологические реакции организма в ответ на проникновение микробного агента.

ПЦР-диагностика является наиболее современным и перспективным методом диагностики вирусных гепатитов и другой инфекционной патологии, постепенно вытесняет классический бактериологический, серологический и вирусологический метод. Иммуноферментный анализ определяет антитела (иммуноглобулины) определенных классов, поэтому может быть применен как дополнение к молекулярно-генетическим методикам выявления вируса.

Недостатки ПЦР-диагностики немногочисленны:

• высокая стоимость исследования – минимальный пакет только молекулярно-генетических исследований, необходимый при гепатите С стоит порядка 5000 российских рублей, а необходимы и другие тесты;
• определенное оснащение лабораторного комплекса – ПЦР осуществляет только квалифицированный сотрудник на дорогостоящем амплификаторе;
• ограниченная недоступность исследования для пациентов, так как амплификаторы могут позволить приобрести только крупные лабораторные центры;
• техническая погрешность – при использовании низкочувствительной (низкого качества) тест-системы или праймера возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Виды анализа на гепатит C методом ПЦР

Анализы крови для полноценной диагностики гепатита С предполагает несколько исследований. К ним относится: качественный анализ, количественный, генотипирование и определение аллельного полиморфизма генов некоторых ферментов и цитокинов.

Качественный анализ является первым и самым главным, так как проводится определение наличия возбудителя или его отсутствие в крови пациента. Это исследование делается при первичном обследовании для подтверждения диагноза, а также после окончания курса противовирусной терапии, чтобы показать эффективность лечения и факт полного выздоровления пациента.

Количественный анализ – это так называемая вирусная нагрузка. В режиме реального времени подсчитывается количество вируса (копий вирусных частиц) в 1 мкл крови пациента. Показатель вирусной нагрузки отражает активность размножения возбудителя гепатита С и активность патологического процесса. В результате применения противовирусных препаратов вирусная нагрузка снижается, после завершения полного курса терапии исчезает. Проведение количественного анализа при отрицательном результате качественного нецелесообразно.

Применение диагностических тест-систем позволяет с высокой точностью определить показатель вирусной нагрузки. В прайс-листах лабораторных комплексов этот вариант указывается как ультрачувствительный метод. Его преимущество – высокая точность, но и с ней же связан главный недостаток – высокая цена.

Генотипирование вируса – это идентификация определенного генотипа возбудителя гепатита С. В мире известно 6 генотипов вируса гепатита С. Эта информация важна для выбора правильного противовирусного лечения, так как не все препараты одинаково эффективны в отношении различных генотипов. Генотипирование проводится однократно, повторные тесты нецелесообразны, так как генотип вируса не меняется.

Определение аллельного полиморфизма генов – новейшая методика, которая предполагает изучение генотипа пациента с целью прогнозирования возможных результатов на определенный вариант лечения, скорость развития цирроза печени и других исходов болезни. Например, изучается полиморфизм интерлейкина IL 28, генотип ТТ ассоциируется с хорошим результатом противовирусного лечения интерфероном. Это исследование также проводится однократно, так как геном хозяина не меняется.

Показания к проведению исследования

Показанием к проведению исследования является подтверждение диагноза гепатита С или его исключение. Если пациент с подтвержденным диагнозом хронического гепатита С начинает противовирусную терапию, то перед этим необходимо определить уровень вирусной нагрузки.

Когда заканчивается 1 месяц такой терапии уровень вирусной нагрузки определяется повторно, снижение этого показателя отражает эффективность назначенных лекарственных средств. Если уровень вирусной нагрузки остается прежним или увеличивается, то нецелесообразно продолжать прием назначенных медикаментов ввиду их неэффективности, пациент нуждается в выборе других противовирусных препаратов.

После завершения курса противовирусного лечения пациенту назначается качественный анализ ПЦР, чтобы подтвердить полную элиминацию вируса из организма.

• Если в крови все-таки обнаруживается вирус гепатита С, то еще раз оценивают уровень вирусной нагрузки.
• Если качественный анализ отрицательный, то количественный анализ не нужен.

Как подготовиться к сдаче анализа

Специальной подготовки для проведения ПЦР-диагностики не требуется. Большинство лабораторий указывает только общие для всех биохимических и серологических тестов требования:

• накануне взятия крови пациенту следует прекратить прием лекарственных средств, в первую очередь, гормональных, изменяющих реологические свойства крови, при невозможности отмены – предупредить об этом лечащего доктора и лабораторного сотрудника;
• последний прием пищи необходимо осуществить за 8-10 часов до посещения лаборатории;
• взятие крови для ПЦР-диагностики предпочтительно запланировать на первую половину дня;
• в день забора крови допускается только употребление умеренного количества воды, но не пищи – исследуется только кровь натощак.

Скорость получения результатов зависит от загруженности лабораторного комплекса и от того, как далеко транспортируется взятый биологический материал. Прайс-лист лаборатории обычно указывает количество дней, в течение которых готовится исследование.

Расшифровка результатов

Результат только ПЦР-диагностики не несет исчерпывающей информации (норма или патология), его необходимо оценивать в комплексе с биохимическими и серологическими тестами. Только комплексный подход позволяет правильно оценить активность патологического процесса и необходимость назначения противовирусной терапии.

Качественный анализ

Оценка результатов качественного ПЦР-анализа на вирус гепатита С проста. Возможно всего 2 варианта:

• отрицательный (РНК вируса гепатита С не обнаружена) – гепатита С нет, дальнейшее обследование на этот гепатит не требуется;
• положительный (РНК вируса гепатита С обнаружена) – поражение печени есть, необходимы другие тесты для установления активности патологического процесса и принятия решения о необходимости противовирусной терапии.

Какие еще тесты необходимы, расскажет лечащий доктор.

Количественный анализ

Количественный показатель (он же вирусная нагрузка) определяется при первичном обследовании пациента для установления активности патологического процесса. Чем выше этот показатель, тем выше активность процесса, тем более необходима пациенту специфическая терапия. В среднем результат качественного анализа можно расценивать следующим образом:

• более 800 × 10³ копий – показатель вирусной нагрузки высокий, с большой вероятностью пациенту потребуется противовирусная терапия;
• менее 800 × 10³ копий – показатель вирусной нагрузки низкий, необходимость специфического лечения оценивается по результатам других тестов (качественный ПЦР и биохимия – функциональные пробы печени);
• вирусная нагрузка не определяется – репликации вируса гепатита С нет, идеальный результат после завершения курса противовирусной терапии.

Различные лаборатории могут указывать другие диапазоны высокого и низкого уровня количественного анализа ПЦР. Как расшифровывается результат обследования конкретного пациента, следует спрашивать у лечащего доктора.

Генотипирование

Результаты генотипирования – определения генотипа вируса гепатита С – однозначны. Всего известно 6 генотипов вируса – 1, 2, 3, 4, 5, 6. В РФ чаще всего обнаруживаются 1 и 3 генотипы, несколько реже 2 и 4. Генотипы 5 и 6 регистрируются преимущественно в африканских странах.

Информация о генотипе необходима для правильного выбора специфических противовирусных средств, так как определенные лекарственные субстанции эффективны в отношении только определенного генотипа вируса.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный на гепатит С

ИФА – иммуноферментный анализ определяет антитела к вирусу гепатита С. Это могут быть острофазные антитела (иммуноглобулины класса М) или суммарные (иммуноглобулины класса М и G).

Возможен вариант, когда ИФА положительный (обнаружены суммарные антитела к вирусу гепатита С), а ПЦР отрицательный. Такой результат свидетельствует о том, что пациент перенес гепатит С (острый или хронический), но размножения вируса нет. Противовирусное лечение такому пациенту не показано.

Заключение

ПЦР-диагностика вирусного гепатита С достаточно сложна, так как включает несколько показателей. Учитывая необходимость комплексного подхода в обследовании пациента, расшифровку всех исследований необходимо осуществлять лечащему врачу.